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细菌内毒素_

发布日期:2022-09-28 12:18:31 来源:bob棋牌娱乐 作者:bob官方平台

  打针液细菌内毒素查看 2011年11月19日 目录 ? 细菌内毒素的界说 ? 细菌内毒素查看的原理 ? 实验试剂 ? 实验用具 ? 查看办法概述 ? 内毒素限值确认 ? 供试品溶液制备 ? 最大稀释倍数(MVD)确认 ? 鲎试剂活络度复核 ? 搅扰实验 ? 供试品细菌内毒素查看 细菌内毒素界说 ? 细菌内毒素,英文称Endotoxin, 是G-菌细胞壁个层上的特有结构, 内毒素为外源性致热原,它可激活 中性粒细胞等,使之释放出一种内 源性热原质,效果于体温调理中枢 引起发热。细菌内毒素的首要化学 成分为脂多糖。脂多糖对宿主是有 毒性的。内毒素只要当细菌逝世溶 解或用人工办法损坏菌细胞后才释 放出来,所以叫做内毒素。 ? 内毒素不是蛋白质,因而十分 耐热。在100℃的高温下加热1小时 也不会被损坏,只要在160℃的温 度下加热2到4个小时,或用强碱、 强酸或强氧化剂加温煮沸30分钟才 能损坏它的生物活性。与外毒素不 同之处在于:内毒素不能被稀甲醛 溶液脱去毒性成为类毒素;把内毒 素打针到机体内虽可产生一定量的 特异免疫产品(称为抗体),但这 种抗体抵消内毒素毒性的效果弱小。 细菌内毒素查看的原理 ? 运用鲎试剂与微量内 毒素产生凝聚反应的 现象,以判别供试品 中细菌内毒素的定量 是否符合规定的一种 办法。 ? 细菌内毒素的量用内 毒素单位(EU)表明。 实验试剂 ? 鲎试剂 从海洋无脊椎动 物“鲎”的蓝色血液中提 取的变形细胞溶解物,经 低温冷冻干燥精制而成的 生物制剂。 鲎试剂的生物活性以其能 检出细菌内毒素的最低有 效浓度表明,即鲎试剂的 活络度,单位为EU/ml。 当运用新批号的鲎试剂或 实验条件产生或许影响检 验成果的改动时,应进行 鲎试剂活络度复核实验。 实验试剂 ? 细菌内毒素国家规范品 系自大肠埃希菌提取 精制得到的内毒素,用于标定细菌内毒素作业标 准品和标定,裁定鲎试剂活络度。 ? 细菌内毒素作业规范品系以 内毒素国家规范品为基准 价,用于实验中鲎试 搅扰实验及各 细菌 标定其效 剂活络度复核、 种阳性对照。 ? 细菌内毒素查看用水 毒素含量小于0.015EU/ml 胶法)或0.005EU/ml 定法)且对内毒素 的灭菌打针用水。 指内 (用于凝 (用于光度测 实验无搅扰效果 实验用具 ? 刻度吸管、凝聚管(10×75mm)、三角瓶、小试管 (16×100mm)、试管架、洗耳球、封口膜或金属试管 帽、时钟、脱脂棉、吸水纸、剪刀砂轮。 ? 耐热器皿常用干热灭菌法(250℃、30 分钟以上)去除, 塑料用具应选用标明无内毒素而且对实验无搅扰的器械 (现在多为无热原的一次性用品 )。 检测办法概述 ? 凝胶法 定量实验 半定量实验 ? 光度测定法 浊度法(结尾浊度法和动态浊度法) 显色基质法(结尾显色法和动态显色法) 凝胶法:最简略、经济、运用最广泛,我国药典的“裁定” 办法 对搅扰相对不活络。 较光度测定法不活络 内毒素限值确认 ? 一般按公式: L=K/M 式中 L 为供试品的细菌内毒素限值,以EU/ml、EU/mg 或EU/U(活性单位) 表明。 K 为人每公斤体重每小时最大可接受的内毒素剂量。打针剂K=5EU/ (kg·h),放射性药品打针剂K=2.5EU/(kg·h),鞘内用打针剂 K=0.2EU/(kg·h)。 M 为人用每公斤体重每小时的最大供试品剂量,根据药品运用说明书, 《临床用药须知》确认。 ? 例:某产品M为14.3mg/kg,L=5/14.3=0.35EU/mg 假如此产品的浓度为100mg/ml,那么, L=0.35100=35EU/ml 一般内毒素限值确实认都应与我国药典(2010版)相符。 供试品溶液制备 ? 某些供试品需进行复溶、稀释或在水性溶 液中浸提制成供试品溶液。 ? 一般要求供试品溶液的pH 值在6.0~8.0 的 范围内。 ? 可运用酸、碱溶液或适合的缓冲液调理pH 值。 最大稀释倍数确认 ? 最大有用稀释倍数(MVD) 指在实验中供试品溶液 被答应稀释的最大倍数,在不超越此稀释倍数的浓度下进 行内毒素限值的检测。 ? MVD=cL/λ 式中L 为供试品的细菌内毒素限值;c 为供试品溶液的浓 度,当L 以EU/ml 表明时,则c 等于1.0ml/ml,当L以 EU/mg 或EU/U 表明时,c 的单位需为mg/ml 或U/ml。如 供试品为打针用无菌粉末或原料药,则MVD 取1,可计算 供试品的最小有用稀释浓度c=λ/L;λ为在凝胶法中鲎试剂 的标明活络度(EU/ml)。 鲎试剂的活络度复核 ? 意图 调查鲎试剂的活络度是否精确、调查查验人员操作办法是否正确及实验条件是 否符合规定。 当运用新批号的鲎试剂或实验条件产生或许影响查验成果的改动时,应进行鲎试剂活络 度复核实验。 ? 细菌内毒素规范溶液的预备 1、取细菌内毒素作业规范品(或国家规范品)一支,轻弹瓶壁,使粉末落入瓶底,然 后用砂轮在瓶颈上部悄悄划痕,75%酒精棉球擦洗后启开,启开过程中应避免玻璃屑 落入瓶内。 2、依照规范品说明书,参加规定量的细菌内毒素查看用水溶解其内容物,用封口膜将瓶口封严, 置漩涡混合器上混合15分钟。然后进行稀释,制备成4个浓度的细菌内毒素规范溶液,即 2λ、λ、 0.5λ和0.25λ(λ为所复核的鲎试剂的标明活络度)四个浓度的内毒素规范溶液,每稀释一步均应 在旋涡混合器上混匀30 秒钟。 示例 某待复核鲎试剂的活络度标明值为0.25EU/ml,细菌 作业规范品规范为150 EU/ml,将细菌内毒素作业规范品 菌内毒素查看用水溶解,再稀释制备成浓度为 0.25EU/ml,0.125EU/ml和0.06EU/ml的细菌 内毒 用1ml细 0.50 EU/ml, 内毒素规范溶液。 ? 加样 将已充沛溶解的待复核鲎试剂18支(管)放在试管架上, 排成5列,其间4列4支,1列2