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医疗器械的细菌内毒素怎么检测?

发布日期:2022-09-29 01:44:29 来源:bob棋牌娱乐 作者:bob官方平台

  细菌内毒素查看法是运用鲎试剂来检测或量化由革兰阴性菌发生的细菌内毒素,以判别供试品中细菌内毒素的定量是否契合规则的一种办法。

  (1)GB/T 14233.2-2005 医用输液、输血、打针用具查验办法第2部分:生物学实验办法;

  (3)试管恒温仪、恒温水浴箱或适合的恒温器,可设定温度为(37±1)℃。

  (6)细菌内毒素国家规范品或细菌内毒素作业规范品,应具有国家主管部门的批准文号。

  (7)细菌内毒素查看用水应契合灭菌打针用水规范,其内毒素含量小于0.015EU/ml(用于凝胶法)或0.005 EU/ml(用于光度测定法),且对内毒素实验无搅扰效果。

  (8)实验用具:剪刀、砂轮、试管、三角瓶、试管架、洗耳球、封口膜、75% 乙醇棉、时钟、移液管(或刻度吸管)、凝集管(10 mm×75 mm)、微量加样器及无热原吸头。耐热器皿须经250℃干烤至少30min。若运用与微量加样器配套的吸头号塑料用具时,应选用标明无内毒素而且对实验无搅扰的器械。

  将玻璃器皿放入铬酸洗液中充沛浸泡,然后取出将洗液控干,用自来水将残留洗液完全洗净,再用蒸馏水重复冲刷3 遍以上,控干后放入适合的密闭金属容器中或用锡箔纸包好后再放入金属容器内,放入电热干燥箱。

  玻璃器皿置电热干燥箱后,待干燥箱温度升至250 ℃后开端计时,干烤30 min以上。到达规则时刻后,关断电源,待干燥箱温度天然降至室温。

  供试品应运用细菌内毒素查看用水为浸提介质,一般供试品溶液和鲎试剂混合后溶液的 pH值为6.0~8.0为宜。选用无热原氢氧化钠或盐酸溶液调理供试液的pH值。无热原氢氧化钠或盐酸溶液须用细菌内毒素查看用水,在已去除内毒素的容器中制造。也可运用不含内毒素和搅扰因子且通过验证的缓冲液。

  运用鲎试剂与细菌内毒素发生凝集反响的机制,以判别供试品中细菌内毒素的定量是否契合规则。如经查验证明供试品对细菌内毒素实验有不能扫除的搅扰效果则不适合选用本实验。本实验操作进程应防止内毒素的污染。

  在运用一批新的鲎试剂进行供试品细菌内毒素查看或供试品搅扰实验前,实验室有必要进行鲎试剂灵敏度复核实验。意图为调查鲎试剂的灵敏度是否精确,一起也考察查验人员操作办法是否正确及实验条件是否契合规则。

  将试管架从水浴或恒温器中悄悄取出,防止振荡,将每管拿出慢慢倒转 180°调查,若管内构成凝胶,而且凝胶不变形,不从管壁滑脱者为阳性,记载为(+);未构成凝胶或构成的凝胶不坚实、变形并从管壁滑脱者为阴性,记载为(-)。保温文拿取试管进程应防止遭到振荡形成假阴性成果。

  当λc 在 0.5~2.0 λ(包含 0.5 λ 和 2.0 λ)时断定该批鲎试剂灵敏度复核合格,可用于搅扰实验和供试品细菌内毒素查看,并以λ(标明灵敏度)为该批鲎试剂的灵敏度。

  在细菌内毒素查看中,每批供试品有必要做2支供试品管和2支供试品阳性对照,一起每次实验须做2支阳性对照和2支阴性对照。

  (1)实验前,须用番笕洗手,用75%乙醇棉球消毒,实验操作应在清洁环境中进行,进程中应防止内毒素的污染。

  (2)在运用洗耳球、移液管取样时,应留意不要将洗耳球中的气体吹入溶液中,以防止气体中的内毒素进入供试液。

  (3)实验所用用具经250℃干烤30min以上,要待烤箱温度升至250℃后开端计时。在不打开金属容器的状况下,可在2d内运用;假如玻璃器皿用锡箔纸包装,在不打开包装的状况下可在两周内运用,不然须再次干烤。

  (4)敞开细菌内毒素国家规范品或作业规范品、鲎试剂时,先轻弹瓶壁,使粉末落入瓶底,然后用砂轮在瓶颈上部悄悄划痕,75%乙醇棉球擦洗后启开,启开进程中应防止玻璃碎片落入瓶内。

  (5)无菌医疗器械出产企业在出产进程中须严格控制产品初始污染菌,防止导致灭菌后产品细菌内毒素目标超越限值。

  (6)关于非液态产品企业拟定产品技能要求时,如按EU/ml规则细菌内毒素限值在实验办法中则需清晰产品的浸提液体积。

  (7)按GB/T14233.2-2005医用输液、输血、打针用具查验办法第 2部分:生物学实验办法进行供试品细菌内毒素查验时,供试液应在(37±1)℃恒温箱中浸提不小于 1h,供试液储存应不超越2h。

  (8)溶解鲎试剂及混匀供试品和鲎试剂时,不要剧烈振荡防止发生气泡;实验进程中应留意替换吸头,以防止查看用水的污染及溶液的穿插污染。

  (9)因为凝集反响是不可逆的,所以在反响进程中及调查成果时应留意不要使试管遭到振荡,防止使凝胶破碎发生假阴性成果。

  (10)进行搅扰实验时,规范对照系列和含内毒素的供试品溶液系列应一起进行;如经查验证明供试品对细菌内毒素实验有不能扫除的搅扰效果则不适合选用凝胶极限法。

  (11)在进行鲎试剂灵敏度复核、搅扰实验和供试品细菌内毒素查看时,各个实验中要求的对照顾一起进行,并在实验有用的状况才干进行核算和判别。

  (12)关于一个初包装内有多组件的成套器械,如规则的内毒素限值是针对成套器械的,可以用一份浸提液对一切组件浸提,也可将各组件别离浸提后混合,各组件所用的浸提液总体积应不超越MVD,当组合后样品呈现成果不确定时,则需别离查验各组件,以研讨各组件的污染源。

  (13)如一个初包装产品为多个医疗产品的调集,在临床运用中每种医疗器械独立运用,则应有各自的产品内毒素限值,且应别离进行实验和点评。

  (14)2015年版《我国药典》1143细菌内毒素查看法包含凝胶法和光度测定法,后者包含浊度法和显色基质法。供试品检测时,可运用其间任何一种办法进行实验。当测定成果有争议时,除还有规则外,以凝胶极限实验成果为准。